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甲基化特异性pcr(msp)
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甲基化特异性pcrmsp


【技术简介】

(1)技术原理

    甲基化特异性的pcr是一种灵敏度高且操作相对简单的甲基化研究方法。重亚硫酸盐处理dna后,基因组dna发生的由甲基化状态决定的序列改变。随后进行引物特异性的pcr。该方法引物设计是关键。msp中设计两对引物,即一对结合处理后的甲基化dna链(引物对m),另一对结合处理后的非甲基化dna链(引物对u)。检测msp扩增产物,如果用引物m能扩增出片段,则说明检测位点存在甲基化;若用引物u扩增出片段,则说明被检测的位点不存在甲基化。

2)技术应用     

    肿瘤的早期预测、分类分级、预后评估及多种疾病的分析;转录水平分析:位于启动子区域的甲基化一般会抑制转录;细胞凋亡等调控机制的研究。

【服务内容】

根据待测基因序列设计相应引物;基因组dna的提取和质量检测;亚硫酸氢钠修饰基因组dna;修饰后dna纯化回收;根据实验的要求进行bsp或者qmsp实验;实验结果的分析以及向客户提供实验报告。

【客户须知及标本要求】

1)组织样品:新鲜组织放入液氮或-80度保存,组织不少于100mg
2)培养细胞:通过细胞计数取不少于2×106个细胞于ep管,加入0.5ml生理盐水或蛋白保护剂,混匀后保存于冰箱(-80℃,避免反复冻融);
3)血液细胞标本:以抗凝管保存血样或以淋巴细胞分离液分离细胞后加入0.5ml生理盐水或蛋白保护剂,保存(-80℃可长期保存,避免反复冻融);
4)血清或细胞培养液标本:离心去掉杂质后取上清入ep管,保存(4℃可保存15-20天,-80℃可长期保存,避免反复冻融);
5)样本运输:可选择以下任何一种方式寄送标本
组织样本、细胞样本以干冰运输或加入蛋白保护剂后,加冰袋寄送;
细胞样本也可直接寄送培养瓶(密封保证不污染、培养液不漏出);
血清或上清液直接加冰袋寄送(运送视路程远近2-3天可到达)。